創(chuàng)新科技
創(chuàng)新決定未來，奇天基因?qū)Ｗ⒂诘葴睾怂釘U增技術的研發(fā)及應用，擁有RAA技術專利授權。致力于打造精準、高效、快速、便攜的核酸檢測平臺。
食品安全檢測篇
2024-03-30
1.食源微生物
1.1 Multiplex bacteria detection using one-pot CRIS-PR/-Cas13a-based droplet microfluidics
1.2Rapid detection of Salmonella with RecombinaseAided Amplification
1.3不對稱重組酶介導擴增結(jié)合分子信標檢測金黃色葡萄球菌方法的建立與應用
1.4重組酶介導擴增技術快速檢測沙門菌方法的建立
1.5重組酶介導擴增方法快速檢測A族乙型溶血性鏈球菌
1.6CRISPR-Cas13a 結(jié)合重組酶介導的擴增快速檢測副溶血性弧菌方法的建立
1.7 CRISPR-Cas13a輔助RAA快速檢測金黃色葡萄球菌的研究
1.8重組酶介導等溫核酸擴增方法快速檢測土壤沙門氏菌
1.9重組酶介導等溫擴增技術檢測哈維氏弧菌
1.10動物源性食品中致病微生物的快速PCR檢測
2.綜述
2.1重組酶等溫擴增技術在分析檢測中的應用研完進展
Multiplex bacteria detection using one-potCRISPR/Cas13a-based droplet microfluidics
Abstract:High-throughput detection of bacteria at low levels is critical in public health,food safety,and first response.Herein,for the first time,we present a platform based on droplet microfluidics coupling with the recombinasealded amplification(RAA)-assisted one-pot clustered regularly interspaced short palindromic repeats togetherwith CRSPR-associated proteins 13a(CRISPR/Cas13a) assay,and droplet encoding strategy for accurate andsensitive deter mination of nudeic adidsfrom various foodborne pathogens.The workflow takes fulladvantageof CRISPR/Cas13a signal amplification and droplet confinement effects,which enhancesthe detection sensitivi-ty and enables end-point quantitation.Meanwhile,by varying the color of droplets,the number of bacteriadetectedatthe same time is greatly improved.Ilt possesses the capability to simultaneously detectseven differ-ent types of foodborne pathogens.Notably,the system is also applied to real food samples with satisfactoryresults.Overall,in view of superiorities inhigh sensitivity,outst anding selectivity,and large-scale multiplexing,the one-pot CRISPR/Cas13a-based droplet microfluidic system could be expanded and universalized for identi-fying other bacteria.
Key words:Bacterla,Multiplex detection,RAA,One-pot CRSPR/Cas13a assay,Droplet microfluidics,Drapletencoding.
Rapid detection of Salmonella withRecombinase Aided Amplification
Abstract:Rapid Salmonella detection using Recombinase Aided Amplification was established.The reactioncompletes in20 min at 39 ℃ and can be performed with a portable device.Once further impraved,this methodshould be a great choice for monitaring contamination,such as foodborne Salmonella or for similar purposes.
Keywords:Salmonella,Re combinase Aided Amplification,Foodborne,Food safety.
不對稱重組酶介導擴增結(jié)合分子信標檢測金黃色葡萄球菌方法的建立與應用
摘要：目的建立一種基于重組酶個導擴增技術(RAA)與分子信標相結(jié)合的病原菌恒溫快速檢測方法。方法方法學的建立。通過金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)所對應的基因設計相應引物及分子信標探針，不斷調(diào)整引物濃度比例以確定最住引物濃度比來進行不對稱擴增，利用不對稱重組酶介導擴增并與分子信標探針雜交,通過瓊脂糖凝膠電泳及熒光采集觀測結(jié)果。將陽性質(zhì)粒以10倍的梯度稀釋，檢測該方法的靈敏度。利用該RAA雜交法檢測大坪醫(yī)院檢驗科微生物室保存的2016年12月的72株包含金黃色葡萄球菌及葡萄球菌屬其他種細菌的菌株，以檢測該方法的特異性。在特異性實驗基礎上添加我室保存的2016年12月的39其他菌株進行 Kappa一致性檢驗及臨床診斷效能評價。結(jié)果當限制性引物與非限制性引物的濃度比例在1:20時，產(chǎn)生單鏈DNA(SSDNA)的效率最高。不對稱RAA擴增與分子信標探針雜交的效率明顯高于對稱擴增。該方法的靈敏度為20拷貝/ul。RAA雜交法能夠?qū)⒔瘘S色葡萄球菌與萄球菌屬其他菌株區(qū)分，與傳統(tǒng)金標準相比Kappa為0.860，一致性良好。經(jīng)過對111株菌株的檢測,該方法敏感度為92.5%(37/40)，特異度為97.2%(691/71)，陽性預測值為94.9%(37/39)，陰性預測值為95.8%(69/72)，陽性似然比為33.04，陰性似然比為0.077,約登指數(shù)為0.897。與傳統(tǒng)金標準相比,Kappa為0.902,兩種方法一致性良好。結(jié)論通過對不對稱RAA擴增條件的優(yōu)化及與分子信標探針的結(jié)合，建立了RAA雜交技術檢測細菌DNA的新方法，為恒溫擴增應用于臨床奠定基礎。(中華檢驗醫(yī)學雜志，2017，40:309-313)
關鍵詞：金黃色葡萄球菌；核酸擴增技術；分子探針
重組酶介導擴增技術快速檢測沙門菌方法的建立
摘要：目的采用重組酶介導核酸擴增方法(Recombinase aided amplification,RAA)，建立沙門菌快速檢測方法。方法根據(jù)沙門菌的 invA 基因設計引物和探針，通過構(gòu)建含目的基因片段的質(zhì)粒分析RAA方法的靈敏度，通過檢測大腸桿菌、志賀菌驗證方法的特異性，并檢測沙門菌陽性樣本進行驗證。結(jié)果建立的方法在39℃下進行，檢測時間在20 min以內(nèi)，檢測下限為102拷貝ul，與大腸桿菌、志賀菌無交叉反應，特異性良好。結(jié)論建立的RAA檢測方法具有快速、靈敏、特異以及操作簡便等特點,適用于沙門菌的快速檢測。
關鍵詞：沙門菌；重組酶介導擴增；分子檢測
